二氧化氯和过氧乙酸对矿泉水卫生指标菌杀灭效果的观察

　　随着日渐成为人们日常饮用水的主要来源，矿泉水的安全问题受到了越来越多的关注。新的《饮用天然矿泉水》国家标准[1]已于2009年10月1日正式实施，其中的微生物指标增加了铜绿假单胞菌、粪链球菌和产气荚膜梭菌三项致病菌的检测，而取消了细菌总数，其目的在于强调产品的微生物安全，与国际标准接轨。

　　具有很强的氧化作用，而且它不会发生氯的替代反应，因而不会产生致癌、致畸变的有机氯代产物，被联合国卫生组织(WHO)列为A1级安全[2]。过氧乙酸则是一种用途广泛的酸性氧化型消毒剂，可用于一般物体表面和食品加工机械管道、工具、包装物、餐具及环境消毒，并在多个领域得到了广泛的推广应用[3]。因此，矿泉水生产企业常将二氧化氯和过氧乙酸消毒液用于回收桶的消毒。

　　研究表明[4~5]，在我国天然矿泉水的水源中，铜绿假单胞菌的阳性率约为20%~25%；而粪链球菌和产气荚膜梭菌也是水源污染的指示菌。因此，在生产过程中，由于交叉污染等一些原因，回收桶也可能带有这些致病菌。本文的目的旨在研究二氧化氯和过氧乙酸对这三种矿泉水卫生指标菌的杀灭效果，从而为实际生产中两种消毒剂的消毒浓度和时间提供参考，防止由于消毒不彻底而造成卫生安全事故。

　　1 材料与方法

　　1.1 消毒剂的配制

　　试验所用的稳定性二氧化氯和过氧乙酸消毒液均由广东环凯微生物科技有限公司提供。稳定性二氧化氯为二元制剂，按消毒剂:活化剂=10:1(v/v)活化10 min后，按五步碘量法[6]对二氧化氯的有效含量进行测定，然后稀释到所需要的浓度备用。过氧乙酸消毒液为一元制剂，按间接碘量法[7]（GB/T 19104-2006）对过氧乙酸的有效含量进行测定，然后稀释到所需要的浓度备用。

　　1.2 菌悬液制备

　　试验菌为铜绿假单胞菌（ATCC 15442），粪链球菌（ATCC 25912）和产气荚膜梭菌（ATCC 13124）。铜绿假单胞菌和粪链球菌取营养琼脂培养基斜面新鲜培养物（18~24 h），用磷酸盐缓冲液（PBS）洗下斜面上菌苔，并稀释配制成试验浓度菌悬液。产气荚膜梭菌直接取疱肉肉汤培养基中的新鲜培养物（18~24 h），用PBS稀释配制成试验浓度菌悬液。

　　1.3 中和剂鉴定试验

　　试验菌为铜绿假单胞菌、粪链球菌、产气荚膜梭菌，试验设6组，按照《消毒技术规范》（2002版）[8]中规定的中和剂鉴定试验程序进行试验和结果判定。

　　1.4 悬液定量杀菌试验

　　试验在20 ℃水浴条件下进行。按照《消毒技术规范》（2002版）中的悬液定量杀菌试验方法，在灭菌大试管中加入0.5 mL菌悬液，再加入0.5 mL有机干扰物质（3%牛血清白蛋白），混匀。加入4.0 mL相应浓度的消毒剂，作用至预定时间。取菌药混合物0.5 mL至4.5 mL中和剂试管内，混匀，中和10 min。梯度稀释，取1.0 mL接种无菌平皿，倾注琼脂培养基并混匀。其中，铜绿假单胞菌和粪链球菌采用胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）培养基，产气荚膜梭菌采用亚硫酸盐多粘菌素磺胺嘧啶琼脂基础（SPS基础）培养基。待培养基凝固后，铜绿假单胞菌和粪链球菌于37 ℃培养48 h，产气荚膜梭菌于37 ℃厌氧培养48 h，观察结果。计数平板菌落数，计算杀灭率。试验重复3次。

　　2 结果

　　2.1 中和剂鉴定试验结果

　　以三种试验菌株为代表的中和剂鉴定试验结果表明，用含2 g/L硫代硫酸钠+3 g/L卵磷脂+10 g/L吐温80的PBS溶液组成的中和剂，可有效中和试验浓度二氧化氯和过氧乙酸消毒剂的残余作用，中和剂和中和产物对试验菌及培养基均无影响。

　　2.2 悬液定量杀菌试验结果

　　不同浓度二氧化氯和过氧乙酸对铜绿假单胞菌、粪链球菌、产气荚膜梭菌的杀灭效果不同，实验表明，二氧化氯对铜绿假单胞菌、粪链球菌和产气荚膜梭菌杀灭率达到100%的条件分别为50 mg/L、1 min（结果在表1中未列出），35 mg/L、3 min和35 mg/L、3 min。而过氧乙酸消毒液100 mg/L作用3 min或者200 mg/L作用1 min对三种致病菌均能杀灭率达100%。

　　3 讨论

　　二氧化氯和过氧乙酸属于氧化型消毒剂，他们具有广谱高效，快速杀灭各种微生物的特点。从试验结果来看，这两种对矿泉水卫生指标新增的三种致病菌具有良好的杀菌效果，在较低浓度和较短时间内能有效杀灭这些微生物。但是，一般认为，二氧化氯的杀菌效果受有机物的影响非常明显，但这样可能与有机物的类型和浓度有关[3]。同样地，过氧乙酸的杀菌效果也或多或少受到有机物的影响。因此，在实际使用过程中，在桶装饮用水生产过程中，对回收桶进行消毒前必须进行有效的清洗，以降低有机物的含量，从而保证消毒效果。

　　 铜绿假单胞菌在很多水源水中能被检出，而且它极易产生耐药性，其产生耐药性的机理很复杂，已经成为研究微生物耐药性的模式菌种。从试验结果来看，铜绿假单胞菌对二氧化氯和过氧乙酸的抵抗力也较粪链球菌和产气荚膜梭菌要强。因此，在生产过程中，应加强对铜绿假单胞菌的检测。

　　 产气荚膜梭菌为能产生芽孢的食源性致病菌，其孢子在水中的时间存活较大肠菌群长得多，并能抵抗消毒剂。由于产气荚膜梭菌孢子存活时间长，最适宜用作断续污染和长期污染的指标。因此，研究二氧化氯消毒剂对产气荚膜梭菌孢子的杀灭作用更具有实际意义。

　　
　　参考文献

　　[1]饮用天然矿泉水．中华人民共和国国家标准GB 8537－2008．

　　[2]白莲．二氧化氯的制备与应用．科技信息，2006，5: 56~57．

　　[3]薛广波主编．现代消毒学．北京．人民军医出版社，2002，359，384．

　　[4]邓梅清，张菊梅，郭伟鹏，等．矿泉水中铜绿假单胞菌污染状况调查研究．中国卫生检验杂志，2009，11: 2672~2673．

　　[5]马群飞，林坚，陈美兰，等．饮用天然矿泉水水源铜绿假单胞菌污染调查．中国供水卫生，2000，8（4）: 36~38．

　　[6]二氧化氯消毒剂卫生标准．中华人民共和国国家标准GB26366－2010．

　　[7]过氧乙酸溶液．中华人民共和国国家标准GB/T 19104-2008．

　　[8]卫生部卫生法制与监督司．消毒技术规范．北京．中华人民共和国卫生部，2002．